綿羊蛋白酪氨酸酶受體K(PTPRK)ELISA試劑盒

ELISA測(cè)定結(jié)果如何計(jì)算.ELISA測(cè)定結(jié)果計(jì)算如下：1.計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)(NCX )和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX)。2.兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)大于一個(gè)特定的數(shù)值，例如0.400，試驗(yàn)才有效。3.3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。4.陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算：陽(yáng)性判定值=NCX+0.05。5.標(biāo)本A值>陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性判定值的為陰性。需要注意的是，試劑盒的常數(shù)只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。

酶聯(lián)吸附法（ELISA）是一種靈敏、特異的學(xué)技術(shù)，常用于醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域中的抗原或檢測(cè)。其使用范圍包括：1.臨床診斷：ELISA可以用于檢測(cè)傳染病（如、等）、標(biāo)志物等，協(xié)助進(jìn)行診斷。2.食品安全：ELISA可以用于檢測(cè)食品中的有害（如殘留、獸藥殘留等），保障食品安全。3.監(jiān)測(cè)：ELISA可以用于評(píng)估水質(zhì)、空氣等指標(biāo)，監(jiān)測(cè)狀況。4.生物分子檢測(cè)：ELISA可以用于檢測(cè)生物分子，如蛋白質(zhì)、多肽、等，在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。總之，酶聯(lián)吸附法在醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，是臨床診斷和中重要的輔助手段。

標(biāo)記

良好的酶結(jié)合物取決于兩個(gè)條件：即價(jià)的和高活性的酶。的活性和純度對(duì)制備標(biāo)記至關(guān)重要，因?yàn)樘胤磻?yīng)隨活性和純度的而增強(qiáng)。在酶標(biāo)記中，的活性有所，故需要純度高、效及抗原親和力強(qiáng)的球蛋白使用親和層析提純的，可性，而且可稀釋使用，非特吸附。

酶與交聯(lián)，常用戊二醛法和過(guò)碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標(biāo)記的改良過(guò)碘酸鈉法簡(jiǎn)單易行，標(biāo)記效果好，特別適用于實(shí)驗(yàn)室的小批量制備。其標(biāo)記程序?yàn)椋簩?μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配制的0.06 mol/L的過(guò)碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鐘 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室溫放置30分鐘后加入含5g純化的水溶液1ml，混勻并裝透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩沖液于4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時(shí)（或過(guò)夜）使之結(jié)合，然后吸出，加（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小時(shí)，將上述結(jié)合物混合液加入等體積飽和銨溶液，置4℃冰箱30分鐘后離心，將所得沉淀物溶于少許0.02mol/L、pH7.4PBS中，并對(duì)之透析過(guò)夜（4℃），次日離心除去不溶物，即酶標(biāo)，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，進(jìn)行測(cè)定后，冷凍干燥或低溫保存。

綿羊蛋白酪氨酸酶受體K(PTPRK)ELISA試劑盒

ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點(diǎn)主要包括：1.操作簡(jiǎn)單：該只需要一步操作即可完成，操作簡(jiǎn)單明了，易于。2.快速：ELISA90分鐘一步法可以在短時(shí)間內(nèi)完成，適合于大批量樣品的快速檢測(cè)。3.特高：該采用特定的或抗原進(jìn)行固定和檢測(cè)，因此具有較高的特。4.靈敏度高：ELISA90分鐘一步法具有較高的靈敏度，可以檢測(cè)出較低濃度的抗原或。5.重復(fù)性好：該的重復(fù)性，結(jié)果較為。6.安全性高：ELISA90分鐘一步法不使用放射性同位素等有害，因此具有較高的安全性。需要注意的是，ELISA90分鐘一步法也存在一些缺點(diǎn)，例如可能會(huì)受到非特因素的影響，結(jié)果不準(zhǔn)確。此外，該的試劑成本較高，不適合于小規(guī)模樣品的檢測(cè)。

酶聯(lián)吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或與酶的結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原或，保持其活性，同時(shí)又保留酶的活性。將抗原或與酶連接成酶標(biāo)記抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本(含待測(cè)或抗原)和酶標(biāo)抗原或按一定程序與結(jié)合在固相載體表面的抗原或起反應(yīng)形成固相化抗原-酶復(fù)合物，用洗滌的使固相載體上形成的抗原-酶復(fù)合物與其它成分分離，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的量成一定的比例，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被固相載體上的酶催化生為有色產(chǎn)物，通過(guò)定性或定量檢測(cè)有色產(chǎn)物的量即可確定樣品中待測(cè)的含量。效果測(cè)定

測(cè)定內(nèi)容包括酶和活性、結(jié)合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結(jié)合率。

⑴ 酶與的活性　常用瓊脂擴(kuò)散或電泳法，使抗原與形成沉淀線，經(jīng)PBS漂洗1天，再以蒸餾水浸泡1小時(shí)，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色，如果出現(xiàn)應(yīng)有的顏色反應(yīng)，再用鹽水浸泡，顏色仍然不褪，表示結(jié)合物既有酶的活性，也有活性。良好的結(jié)合物在顯色后，瓊擴(kuò)滴度應(yīng)在1:16以上。另一個(gè)測(cè)定是用系列稀釋的酶標(biāo)直接以ELISA進(jìn)行方陣滴定，此法不僅可以測(cè)定標(biāo)記效果，還可以確定酶標(biāo)的使用濃度。

⑵ 結(jié)合物的定量測(cè)定　一般是對(duì)結(jié)合物中的酶和IgG進(jìn)行定量測(cè)定。常用紫外分光光度計(jì)于403nm和280nm進(jìn)行測(cè)定，然后按下列公式計(jì)算：

酶量（mg/ml）=OD403×0.42

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62

對(duì)于過(guò)碘酸鈉氧化法制備的標(biāo)記量，按下列公式計(jì)算：

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62

已知酶量和IgG量后，即可計(jì)算出標(biāo)記的摩爾（mol）比值。

HRP/IgG摩爾比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

結(jié)合物中酶總量=HRP（mg/ml）×結(jié)合物溶液量

結(jié)合物產(chǎn)率=結(jié)合物中酶總量/標(biāo)記時(shí)加入的酶量×

用于ELISA的結(jié)合物的酶量為400(g/ml時(shí)效果一般，為500(g/ml時(shí)效果，達(dá) 1000(g/ml時(shí)效。mol.比值由于結(jié)合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作為主要參數(shù)。一般認(rèn)為mol.比值為0.7時(shí)效果一般，1.0時(shí)效果，1.5-2.0。酶結(jié)合率為 7%時(shí)效果一般，為9%－10%，達(dá)30%以上。

 

90分鐘一步法ELISA試劑盒可以適用于、、組織勻漿、細(xì)胞上清液等樣本類(lèi)型。這些樣本可以用于檢測(cè)、和其他微生物等病原體，以及、自身性等病理情況。同時(shí)，ELISA試劑盒還可以用于檢測(cè)濃度、維生素等營(yíng)養(yǎng)，以及污染物等有害的殘留量。需要注意的是，不同樣本類(lèi)型和檢測(cè)項(xiàng)目可能對(duì)ELISA試劑盒的靈敏度和特產(chǎn)生影響，因此在選擇使用ELISA試劑盒時(shí)需要根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。

 

ELISA試劑盒的用法包括以下步驟：1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過(guò)夜包被。2.洗滌：棄包被液（拍干，再用無(wú)塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿(mǎn)），每次3min~5min。3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。5.加樣：加入已經(jīng)稀釋好的樣品，37℃反應(yīng)1h。一般樣本加入50-100μl，充分混勻。6.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。7.加入酶標(biāo)試劑：每孔加入100μl酶標(biāo)溶液，37℃，1h。8.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。9.顯色：每孔先加入顯色劑A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，37℃避光10-15min。10.終止及測(cè)定：加入50μl終止液，終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值。

 

主營(yíng)產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA檢測(cè)試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,生化試劑

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